油脂樣品中苯并（a）芘的測定反相液相色譜法

更新時間：2012-11-12

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一、背景

國標GB/T 22509-2008中利用22g的氧化鋁柱進行油脂中的苯并（a）芘測定的前處理，利用氧化鋁吸附油脂，通過80mL的石油醚或正己烷進行洗脫苯并（a）芘。該方法使用溶劑多，操作時間長，而且氧化鋁對某些油樣的凈化效果較差。

本實驗利用Cleanert BAP-2固相萃取柱（裝有經過特殊改性的活性炭）萃取油性樣品中的苯并（a）芘，然后再用甲苯洗脫的方法，開發了一套油脂中苯并（a）芘檢測的新方法，相對于國標GB/T 22509-2008的方法，具有更佳的油脂去除效果、穩定的苯并（a）芘回收率，溶劑用量更少更環保，方法也更簡便。

二、實驗方法

2.1實驗試劑及標準品

正己烷（色譜純，4L/瓶，P/N: AH216），二氯甲烷（色譜純，4L/瓶，P/N: AH300），甲苯（色譜純或分析純重蒸），乙腈（色譜純，4L/瓶，P/N：AH015-4）

苯并（a）芘（100mg/瓶，P/N: B1760）

2.2實驗儀器及耗材
Agilent HPLC，配熒光檢測器，移液槍，PTFE濾頭0.22μm（P/N：AS041320-T）。

三、實驗步驟

3.1試樣處理
（1）使用正己烷配制200ppm苯并（a）芘標準品標樣備用，并用正己烷稀釋成1ppm苯并（a）芘工作液備用。
（2）取0.3g油于12mL樣品瓶（P/N：1509-1800和P/N：1515-1748）中，加1mL正己烷渦旋震蕩溶解，作為待凈化液；若要做加標實驗，根據需要向油中先加入適量的標準品。
3.2 固相萃取方法
固相萃取柱名稱：Cleanert BAP-2 （P/N：Bap10-2）；
固相萃取方法如下：
Ø 活化：2mL正己烷；
Ø 上樣：3.1中的待凈化液；
Ø 淋洗：6mL二氯甲烷；
Ø 洗脫：甲苯12mL，收集于20mL玻璃瓶（P/N：AV7100-7和P/N：AV7920-0）中
Ø 濃縮：將樣液在80℃下氮氣吹干，用0.3mL正己烷定容，過PTFE 0.22um濾頭，收集于1.5mL樣品瓶（P/N：1109-0519和P/N：AV2100-0）的內插管（P/N：0609-0357）中，待測；
3.3液相色譜法檢測條件
（1）色譜條件：
色譜柱：Venusil ASB-C18，4.6mm×250mm×5.0µm（P/N：VS952505-0）；
流動相：乙腈：水 88%：12%；流速：1.0mL/min；進樣量：20µL；
熒光檢測器：發射波長406nm，激發波長384nm。

四、方法學考察

4.1 標準曲線繪制
將標準工作液稀釋到濃度分別為：0.5，1.0，2.0，3.5，5.0，7.5，10.0µg/L，根據峰面積建立標準曲線。根據實際油樣中苯并（a）芘的可能含量，可以將標準曲線的線性范圍延伸到50µg/L。
4.2 樣品分析
將3.1的樣品進樣分析，采用外標法定量。
4.3 計算公式 苯并（a）芘含量按下式計算：
其中：
w為樣品中苯并（a）芘含量，單位為µg/Kg；
c為從標準曲線得到的待測液中苯并（a）芘的濃度，單位為µg/L；
V為待測液體積，單位為µL，本方法為300µL；
m為稱取的油樣品質量，單位為g；

五、測試結果

5.1液相色譜法測試結果

圖1 空白實驗色譜圖

圖2 5µg/L苯并（a）芘的標準樣品的色譜圖

圖3 實際樣品的加標（5µg/L）回收率實驗色譜圖

表1 苯并芘的回收率

	5µg/L標準品	油脂實際樣品	油脂加標樣品	回收率
苯并（a）芘響應值	1334008	78201	1289072	90.77%

六、實驗結論

Cleanert BAP-2 去除油脂中雜質的效果良好，前處理的操作過程簡單快捷。檢測方法可采用液相色譜-熒光檢測法，在5μg/L的添加水平的回收率可達85%以上。